半纤维素含量测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

半纤维素是植物细胞壁中与纤维素紧密结合的多糖混合物，是构成细胞初生壁的主要成分，

广泛存在于植物中，是一种新型可利用能源。
测定原理：

半纤维素经酸处理后转化成还原糖，与 DNS 生成红棕色物质，在 540nm 有特征吸收峰，其

吸光值的大小反映了半纤维素含量的高低。自备仪器和用品:天平、40 目筛，恒温水浴锅、烘箱、酶标仪、96 孔板、80%乙醇、丙酮
试剂组成和配制：

试剂一：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。如有沉淀，80℃加热溶解。

试剂二：液体 100mL×1 瓶，4℃保存。

试剂三：液体 60mL×1 瓶，4℃保存。

试剂四：液体 5mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取：
1、样品 80℃烘干至恒重，粉碎，过 40 目筛。称取 0.01g 样本，加入 80%乙醇 1mL，90℃

水浴 30min，冷却至室温，8000g 25℃离心 10min，弃上清留沉淀，80℃烘干。

2、在上述烘干的沉淀中加入 1mL 试剂一，充分混匀后，95℃水浴 60min，取出冷却后，8000g

25℃离心 10min，弃上清留沉淀，用蒸馏水清洗 3 次（加入 1mL 蒸馏水混匀即可），8000g

25℃离心 10min，弃上清留沉淀，再用丙酮清洗 1 次（加入 1mL 丙酮混匀即可），8000g 
测定操作：
在 EP 管中依次加入如下试剂
计算公式
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.2906x + 0.0609，R2
= 0.9931；x 为标准品浓度（mg/mL），
y 为吸光值。
2、半纤维素含量（mg/g 干重）=（△A- 0.0609）÷ 0.2906÷（W÷V 样总）
 = 6.88×（△A- 0.0609）÷W
W：样品质量，g；V 样总：加入提取液体，2mL。
空白管 测定管
上清（μL） 60
蒸馏水（μL） 60
试剂四（μL） 45 45
蒸馏水（μL） 195 195
充分混匀，90℃水浴 5min，自然冷却，25℃，8000g 离心 10min
取 200μL 上清液于 96 孔板，测定 540nm 处吸光值 A。分别记为 A 空白管和 A 测定
管，ΔA=A 测定管-A 空白管。空白管只要做一管。

计算公式：
1、标准条件下测定的回归方程为 y = 0.2906x + 0.0609，R2

= 0.9931；x 为标准品浓度（mg/mL），

y 为吸光值。

2、半纤维素含量（mg/g 干重）=（△A- 0.0609）÷ 0.2906÷（W÷V 样总）

 = 6.88×（△A- 0.0609）÷W

W：样品质量，g；V 样总：加入提取液体，2mL。 
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