测定原理：

试剂组成和配制：

样本的前处理: 
1、细菌或培养细胞:先收集细菌或细胞到离心管内,离心后弃上清;按照细菌或细胞数量(104个):提取液体积(mL)为 500~100 议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液),超声波破碎细菌或细胞(冰浴,功率 20%或 200W,超声 3s,间隔 10s,重复 30 次);8 10min,取上清,置冰上待测。 2、组织:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL 提取液),进行冰浴匀浆。8 10min,取上清,置冰上待测。 3、血清(浆)样品:直接检测。   
测定操作：
1、 分光光度计或酶标仪预热 30min 以上,调节波长至 340nm,蒸馏水调零。 2、 样本测定 (1)工作液的配置,将试剂二和试剂三转移至试剂一中,充分混合溶解,置于 37℃(哺乳动物)或 25℃(其它物种)水浴 5min;(注 剂一至试剂二和试剂三中,充分混匀溶解后转移至试剂一瓶中,重复 2-3 遍);用不完的试剂分装后-20℃保存,禁止反复冻融 (2)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 10μL 样本和 190μL 工作液,混匀,立即记录 340nm 处 20s 时的吸光值 A1 和 2 光值 A2,计算 ΔA=A1-A2。 
计算公式：
a. 用微量石英比色皿测定的计算公式如下 1、血清(浆)ACL 活力计算  单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=1608×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算 (1)按样本蛋白浓度计算 单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=1608×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算 单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W ×V 样÷V 样总)÷T=1608×ΔA÷W (3)按细菌或细胞密度计算: 单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=3.216×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:比色皿光径,1cm;V 样:加入样本体积 总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500 万。 b. 用 96 孔板测定的计算公式如下 1、血清(浆)ACL 活力计算 单位定义:每毫升血清(浆)每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷V 样÷T=3216×ΔA 2、组织、细菌或细胞中 ACL 活力计算 (1)按样本蛋白浓度计算 单位定义:每 mg 组织蛋白每分钟消耗 1nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=3216×ΔA÷Cpr (2)按样本鲜重计算 单位定义:每 g 组织每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=3216×ΔA÷W (3)按细菌或细胞密度计算: 单位定义:每 1 万个细胞每分钟消耗 1 nmol NADH 定义为一个酶活力单位。 ACL(nmol/min/104 cell)=[ΔA×V 反总÷(ε×d)×109]÷(500×V 样÷V 样总)÷T=6.432×ΔA V 反总:反应体系总体积,2×10-4 L;ε:NADH 摩尔消光系数,6.22×103 L / mol /cm;d:96 孔板光径,0.5cm;V 样:加入样本 样总:加入提取液体积,1 mL;T:反应时间,2 min;Cpr:样本蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;500:细菌或细胞总数,500
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