测定原理：

4CL 催化 4-香豆酸和 CoA 生成 4-香豆酸 CoA，在 333nm 下测 4-香豆酸 CoA 生成速率，即可反映 4CL活性。  

自备实验用品及仪器：
紫外分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：

酶液提取：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104 个）：提取液体积（mL）为 比例（建议 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率 20％或 200W，超声 3s，间隔 10 次）； 8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 
测定操作：
1、 分光光度计 40℃预热 30min 以上，调节波长至 333nm，蒸馏水调零。 2、 样本测定 （1）在试剂二中加入 12.5mL 试剂一充分溶解混匀，置于 40℃水浴预热 10min；现配现用（配好后 24h 内用完）； （2） 测定管：在 1mL 石英比色皿中加入 50μL 样本和 950μL 试剂二，混匀，立即记录333nm 处 40℃反应 30min 后的吸光 管：在 1mL 石英比色皿中加入 50μ
计算公式：
（1）按样本蛋白浓度计算：单位定义：每 mg 组织蛋白每分钟生成 1 nmol4-香豆酸辅酶 A 定义为一个酶活力单位。4CL （nmol/min/mgprot）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(V 样×Cpr) ÷T=31.75×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：单位定义：每 g 组织每分钟生成 1 nm（3）按细菌或细胞密度计算：单位定义：每 1 万个细菌或细胞每分钟生成 1 nmol 4-香豆酸辅酶 A 定义为一个酶活力单位。 （nmol/min/104 cell）＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×109]÷(500×V 样÷V 样总) ÷T=0.063×ΔAV 反总：反应体系总体积，1×10-3 L 酶 A 摩尔消光系数，2.1×104 L / mol /cm；d：比色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.05 mL；V 样总：加入提取液体 反应时间，30 min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；500：细菌或细胞总数，500 万。
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