β葡萄糖醛酸苷酶(βGD)测试盒微量法

商品属性：

测定意义：

β-GD广泛存在于动物组织中，是一种参与侵袭和转移过程的基质降解酶，具有水解固醇葡萄糖醛酸和酸性粘多糖等生理功能。该酶在肝细胞中含量较高。此外在组织中含量丰富，测定β-GD活性对于研究具有重要的意义。
测定原理：

β-GD 催化苯酚 β-D-葡萄糖醛酸产生游离的酚酞，通过测定苯酚含量反应该酶活性高低。自备仪器和用品:可见分光光度计/酶标仪、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

试剂组成和配制：

提取液：液体 100mL×1 瓶，4℃保存；

试剂一：液体 2mL×1 瓶，4℃保存；

试剂二：粉剂×1 瓶，-20℃保存；临用前加入 2mL 蒸馏水，充分溶解待用；用不完的试剂仍

-20℃保存；

试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存；

试剂四：1μmol/mL 标准储备液 10mL，4℃保存；
酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL

提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定操作：
1、分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 540nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

试剂名称（μL） 加样孔

测定管 标准管 空白管

试剂一 20 20 20

试剂二 20 20 20

样本 10

1μmol/mL 标准液 10

蒸馏水 10

混匀后，37℃反应 30min

试剂三 150 150 150

混匀， 540nm 下测定各管吸光值

注意：标准管和空白管只需测一次。
计算公式：
β-GD 活性计算
（1）按样本鲜重计算：
单位定义：每小时每 g 鲜重样品中催化产生 1μmol 酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h/g 鲜重）= (C 标准管×V1)×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
÷(W×V1÷V2)÷T=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷W
（2）按样本蛋白浓度计算：
单位定义：每小时每 mg 组织蛋白催化产生 1μmol 酚酞的量为一个活力单位。
β-GD（μmol/h/mg prot）= (C 标准管×V1)×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）
÷(V1×Cpr)÷T=2×（A 测定管-A 空白管）÷（A 标准管-A 空白管）÷Cpr
C 标准管：标准管浓度， 1μmol/mL；V1：加入样本体积：0.01mL；V2：加入提取液体积，
1mL；T：反应时间，0.5h；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。

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