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商品属性：
检测方法
规格
货号
可见分光光度法
50管/48样
GOY-SH111-B
测定意义：
测定原理：
碱性条件下,蛋白质中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽键,能将 Cu2+还原成 Cu+;2 分子的 BCA与 Cu+结合,生成紫 540-595nm 有吸收峰,562nm 处吸收峰 。 自备仪器和用品: 台式离心机、恒温水浴锅、可见分光光度计、移液器、1 mL 玻璃比色皿和蒸馏水。试剂组成和配制：
试剂 A:液体 60mL×1 瓶,4℃保存。 试剂 B:液体 1.2mL×1 支,4℃保存。 标准蛋白:液体 2 mL×1 支,4℃保存。
工作液配制:
临用前请根据拟用工作液体积(样本数×1 mL),将试剂 A 和 B 按照 50:1 的比例混合,盖紧后充分混匀。
样品中可溶性蛋白质提取:
1. 液体样品:澄清无色液体样品可以直接测定。
2. 组织样品:按照组织质量(g):提取液体积(mL)为 1:5~10 的比例(建议称取约 0.1g 组织,加入 1mL提取液(自备,根据需要选用酶
者蒸馏水或者生理盐水)冰浴匀浆,8000g,4℃离心 10min,取上清,即待测液。
3. 细菌、细胞:按照细胞数量(104 个):提取液体积(mL)为 500~1000:1 的比例(建议 500 万细胞加入 1mL 提取液),冰浴超声波
300w,超声 3 秒,间隔 7 秒,总时间 3min);然后 8000g,4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。
测定操作：
1. 分光光度计预热 30min,调节波长到 562 nm,蒸馏水调零。
2. 工作液置于 60℃水浴预热 30 min。
注意:空白管和标准管只需要做一次。
计算公式：
Cpr (mg/mL) = C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管) = 0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)
Cpr (mg/g)= C 标准品×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ W = 0.5×(A 测定管-A 空白管)÷(A 标准管-A 空白管)÷ W
W: 样本质量,g
注意事项:
BCA 法蛋白含量测定试剂盒,适用于测定蛋白浓度在 20-5000μg/ml 样品。测定前取 1-2 个样做预实验,若A 测定管-A 空白管
用提取液稀释后再测定,以确保测定的准确性。
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