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如何定期筛查细胞系是否污染
2025-12-26
定期筛查细胞系污染是保证实验可靠性的关键，我来帮你梳理一下具体方法和注意事项。
一、核心筛查方法
?PCR检测?
通过扩增支原体特异性基因（如16S rRNA）来检测污染，灵敏度高，适合快速筛查。
?生物荧光法?
用荧光染料（如33258）染色后，在荧光显微镜下观察蓝色荧光斑点，操作简单但需经验判断。
?ELISA检测?
利用酶联免疫吸附反应检测支原体抗原，适合批量样本，但需注意假阳性问题。
?细胞培养法?
将待测样本接种到敏感细胞（如Vero细胞）上，观察细胞病变，结果可靠但耗时较长。
?鸟苷酸酶（AG）检测?
检测支原体特有的酶活性，间接判断污染，适合初步筛查。
?流式细胞仪检测?
通过分析微粒数量和大小快速筛查，适合高通量实验，但需设备支持。
二、筛查频率建议
?新引入细胞?：必须进行支原体检测，合格后再使用。
?常规细胞系?：每3-6个月筛查一次，确保无污染。
?关键实验前?：建议额外增加一次筛查，避免实验失败。
三、操作注意事项
?样本处理?：避免反复冻融，防止样本降解。
?环境控制?：保持细胞房正压通风，定期更换滤网。
?结果验证?：若结果异常，建议用两种方法复检确认。
四、污染预防措施
?试剂管理?：培养基、血清等需过滤除菌，分装后标注日期。
?人员培训?：仅允许经培训并考核合格的人员进入细胞房。
?设备维护?：定期校准生物安全柜、培养箱等设备。
五、常见问题处理
?污染确认?：若发现污染，立即隔离细胞并彻底消毒环境。
?数据异常?：检查样本处理、操作流程及设备状态，必要时重新实验。