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如何正确使用FAS活性测定试剂盒
2025-12-24
一、样本处理
?细胞样本?：按500–1000:1比例（如500万细胞加1mL提取液）冰浴超声破碎（300W，超声3秒/间隔9秒，共5分钟），4℃ 12000g离心20分钟，取上清待测。
?组织样本?：按1:5–10比例（如0.1g组织加1mL提取液）冰浴匀浆，4℃ 12000g离心20分钟，取上清待测。
?液体样本?：如血清/血浆，可直接测定。
二、测定步骤
?仪器预热?：紫外分光光度计/酶标仪预热30分钟以上，调节波长至340nm，蒸馏水调零。
?试剂预热?：试剂三37℃（哺乳动物）或25℃（其他物种）预热15分钟。
?反应启动?：按顺序添加底物和样品，启动反应，每隔一段时间记录吸光度值，计算FAS活性。
三、注意事项
?试剂保存?：提取液4℃保存，试剂一、二、四-20℃保存，试剂三4℃保存。
?操作安全?：避免接触有毒有害物质，控制实验条件稳定性。
?样本要求?：建议做2–3个预期差异大的样本预实验，若吸光值不在测量范围内需稀释或增加样本量。
四、应用领域
主要用于科研，如研究脂肪酸代谢相关疾病、药物研发及生物学机制。
在肿瘤研究中，FAS活性与肿瘤细胞生长和增殖密切相关，可通过测定其活性评估肿瘤恶性程度和治疗效果。
五、自备仪器
紫外分光光度计/酶标仪、水浴锅/培养箱、低温离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔UV板、研钵/匀浆器/超声波细胞破碎仪、冰和蒸馏水。
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