果胶裂解酶测试盒可见分光光度法

商品属性：

测定意义：

果胶裂解酶（EC4.2.2.10）是果胶酶的重要组成部分，是一种能降解植物细胞壁，导致植物 组织软化甚至死亡的解聚酶，来源比较广泛，主要来源于微生物，可用于果汁、果酒的澄清， 提高水果出汁率，植物病毒的纯化，纸浆的漂白和纺织品的生物精炼，在减少环境污染和降 低能源消耗方面具有潜在的应用价值。
测定原理：

果胶裂解酶作用于果胶中的 α-1,4 糖苷键，生成在还原端 C4 和 C5 之间位置具有不饱和键的 不饱和寡聚半乳糖醛酸，在 235nm 处有特征吸收峰。 自备实验用品及仪器 天平、低温离心机、紫外分光光度计、1 mL 石英比色皿、恒温水浴锅。
试剂组成和配制：

提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存。 试剂一：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 试剂二：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。 试剂三：液体 15mL×1 瓶，4℃保存。
酶液提取：
 1．组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织， 加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。10000g ，4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。 2．细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为 500~1000：1 的比例（建议 500 万细胞加入 1mL 提取液），冰浴超声波破碎细胞（功率 300w，超声 3 秒，间隔 7 秒， 总时间 3min）；然后 10000g，4℃离心 10min，取上清置于冰上待测。 3. 培养液：直接测定。
测定操作：
 对照管 测定管 试剂一（μL） 600 试剂二（μL） 600 40℃温育 3min 酶液（μL） 100 100 混匀，40℃反应 30min 试剂三（μL） 300 300 混匀，对照管调零，1mL 石英比色皿测定 235nm 处吸光值 A。
计算公式：
 1. 组织中 PL 活性 （1）按照蛋白浓度计算 酶活性定义：在 40℃，pH5.5 条件下，每毫克蛋白每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳 糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（nmol/min/mg prot）= A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×Cpr）÷T = 64.1×A÷Cpr （2）按照样本质量计算

酶活性定义：在 40℃，pH5.5 条件下，每克组织每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳糖 醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（nmol/min/g 鲜重）= A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×W÷V 样总）÷T = 64.1×A÷W 2. 细胞 PL 活性 酶活性定义：在 40℃，pH5.5 条件下，每 104个细胞每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半乳 糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（nmol/min/104 cell）= A÷（ε×d）×V 反总÷（V 样×细胞数量÷V 样总）÷T = 64.1×A÷细胞数量 3. 培养液 PL 活性 酶活性定义：在 40℃，pH5.5 条件下，每毫升培养液每分钟分解果胶产生 1nmol 不饱和半 乳糖醛酸所需的酶量为一个酶活力单位。 PL 活性（nmol/min/mL）= A÷（ε×d）×V 反总÷V 样÷T = 64.1×A ε：不饱和半乳糖醛酸摩尔消光系数：5200L/mol/cm；d：比色皿光径，1cm；V 反总：反应 总体积，1mL；V 样：反应体系中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr： 样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T：反应时间，30min
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