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猪5BMUC5B elisa试剂盒双抗体夹心法
2025-07-23
这种试剂盒采用酶联免疫吸附试验（ELISA），通过预先包被猪补体片断5b（C5b）捕获抗体的包被微孔，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤后，用底物TMB显色。颜色的深浅和样品中的猪补体片断5b（C5b）呈正相关实验过程中需严格控制反应条件，以确保检测结果的准确性和重复性。首先，将待测样本和标准品加入包被微孔后，需在37℃恒温环境下孵育30分钟，使C5b抗原与捕获抗体充分结合。孵育结束后，需用洗涤缓冲液反复冲洗微孔板5次，去除未结合的杂质，每次洗涤需静置30秒并彻底拍干。
随后加入HRP标记的检测抗体，再次孵育30分钟，使检测抗体与已结合的C5b形成“夹心”复合物。洗涤步骤同样关键，任何残留的游离抗体都可能影响最终显色结果。完成洗涤后，加入TMB显色底物，避光反应15分钟。此时，HRP酶催化TMB产生蓝色产物，颜色深浅与样本中C5b的浓度成正比。
最后，加入终止液（通常为硫酸溶液）终止反应，蓝色立即转变为黄色。使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度（OD值），通过标准曲线计算样本中C5b的浓度。为确保实验可靠性，建议每批次检测均设置复孔，并严格监控标准曲线的线性范围（R2≥0.99）。
该试剂盒灵敏度高、特异性强，适用于血清、血浆或细胞培养上清等样本的检测，可广泛应用于免疫学研究和临床诊断，为补体系统相关疾病的机制探索提供可靠工具。
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