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GV3101(pJlC SA-rep)电击感受态细胞操作方法

2022-06-15

GV3101(pJlC SA-rep)电击感受态细胞操作方法:
1. 感受态细胞从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA (质粒或连接产物) 并用手EP管底轻轻混匀 (避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰上并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000rpm离心一分钟收菌,留取100μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5. 将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少13 h。
基本共性:
1、所有的细胞表面均有由磷脂双分子层与镶嵌蛋白质及糖被构成的生物膜,即细胞膜。
2、所有的细胞都含有两种核酸:即DNA与RNA。
3、作为遗传信息复制与转录的载体。
4、作为蛋白质合成的机器—核糖体,毫无例外地存在于一切细胞内,核糖体,是蛋白质合成的机器,在细胞遗传信息流的传递中起重要作用。
5、所有细胞的增殖都以一分为二的方式进行分裂。
6、能进行自我增殖和遗传
7、新陈代谢
8、细胞都具有运动性,包括细胞自身的运动和细胞内部的物质运动

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小鼠胸腺活化调节趋化因子(mouse TARC)
小鼠凝血酶抗凝血酶复合物(mouse TAT)
小鼠组织因子(mouse TF)
小鼠组织因子抑制物(mouse TFPI)
小鼠转化生长因子-β1(mouse TGF-β1)
小鼠转化生长因子-β2(mouse TGF-β2)
小鼠可溶性粒细胞靶受体(mouse sTREM-1)
小鼠端粒酶(mouse Telomerase)
小鼠Toll样受体-2(mouse TLR-2)
小鼠Toll样受体-4(mouse TLR-4)
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-1(mouse TIMP-1)
小鼠基质金属蛋白酶抑制剂-2(mouse TIMP-2)
小鼠肿瘤坏死因子-a(mouse TNF-a)
小鼠肿瘤坏死因子-b(mouse TNF-b)
小鼠肿瘤坏死因子-r(mouse TNF-r)
小鼠组织纤溶酶原激活剂(mouse t-PA)
小鼠转铁蛋白(mouse Transferrin)
小鼠胸腺基质淋巴细胞生成素(mouse TSLP)
小鼠血栓烷B2(mouse TXB2)
小鼠可溶性肿瘤坏死因子-a受体(mouse sTNF-aR)
小鼠组织多肽抗原(mouse TPA)
小鼠血小板生成素(mouse TPO)