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猪水泡病毒酶联免疫试剂盒操作流程

2021-06-04
猪水泡病毒酶联免疫试剂盒操作流程:
1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,加入纯细胞裂解液100μl。 
2酶标板置4℃,包被过夜。
3洗板:吸干孔内反应液,用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后,即甩去,之后将洗涤液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4阴性对照孔每孔加入pbs 50μl,样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。 
5酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 
6洗板,同4。 
7每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。 
8酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。 
9洗板,同4。 
10每孔加tmb显色液 100μl,轻轻混匀10s,置37℃暗处反应15-20min。 
11每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。 
12分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2,终测得的od值为两者之差w1-w2,以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13数据处理:在得出标本s和阴性对照n的 od值后,计算s/n值。s/n≥2.1为阳性判定标准。产品仅用于科研实验
检测目的:用于测定血清,血浆及相关液体等样本。例如适合检测包括血清、血浆、尿液、胸腹水、灌洗液、脑脊液、细胞培养上清、组织匀浆等标本..需要而未提供
试剂盒组成及试剂配制:
1. 酶联板(Assay plate ):一块(96孔)。 
2. 标准品(Standard):2瓶(冻干品)。
3. 样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。
4. 生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。
5. 辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。
6. 生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)
7. 辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)
8. 底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。 
9. 浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。 

10. 终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

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