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微细毛圆线虫PCR检测试剂盒标准操作步骤
2021-05-19
微细毛圆线虫PCR检测试剂盒标准操作步骤：
1.液氮充分研磨样品。
2.收集研磨成粉末的50mg样品，置于1.5ml离心管中。
3.加入350μl65℃预热的缓冲液IL，并加入20μl蛋白酶K剧烈地漩涡振荡，确保所有的组织团都分散均匀。
4.65℃水浴20-30min。水浴期间颠倒样品数次。
5.加入350μl氯仿，充分混匀，12,000 rpm(~13,400×g)离心5分钟。
6.小心地把上清液吸至另一新的1.5ml离心管中。注意确保不要打散沉淀团或把组织碎片也一起转移。
7.加入4μl RNase A，涡旋混匀。室温放置2min。
8.加入二分之一上清体积的缓冲液IB与等体积的无水乙醇，充分混匀。如：向300μl上清中加入150μl缓冲液IB与300μl无水乙醇。
9.把上述混匀的液体转移到吸附柱上。10,000×g离心1 min以结合DNA，弃去滤出液体。纯化柱*容量为750μl,如果混合液大于750μl,请分两次过柱。
10.将吸附柱重新套回收集管中，加入500μl缓冲液WB至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；
11.将吸附柱重新套回收集管中，加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，10,000×g离心1min,倒弃流出液；
注意：DNA Wash Buffer使用前须按要求用无水乙醇稀释。如果放入冰箱中，使用前须恢复到室温。
12.再加入600μl DNA Wash Buffer至柱子中，8,000×g离心1min,弃去流出液；
13.将吸附柱重新套回2ml收集管中，转速（>13000×g）离心空结合柱1min以干燥柱子的基质；这一步对下面的洗脱步骤至关重要。
14.将柱子置于1.5ml灭菌离心管，加入50-150μl65℃预热的洗脱缓冲液EB至柱子的膜中央。室温静置5min；
15. 室温下，离心(>13000)1min，以洗脱DNA。保留含DNA的流出液。将DNA储于-20℃。
产品仅用于科研如非指出，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。
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